Esta pesquisa apresenta uma investigação sobre a temática Micologia no Ensino Médio (EM) e caracteriza se há ampliação do conhecimento dos alunos que utilizam o livro didático (LD) de Biologia. A escolha do tema foi pautada na importância da temática dos fungos na Biologia, historicamente negligenciados no contexto escolar, e também na relevância que os LD possuem. Primeiramente, foi aplicado um questionário para diagnosticar que saberes os alunos de uma turma de 2º ano do EM possuíam sobre o assunto e, após a apresentação da temática pela professora, foi aplicado um segundo questionário para reconhecer se houve ampliação do conhecimento. Os resultados apontam que a maioria dos estudantes apresentou alguma evolução em termos conceituais ao utilizar o LD como recurso para aprendizagem. Ainda, são sugeridas atividades investigativas sobre a temática Micologia para aproximar os alunos da realidade científica por meio da solução de problemas e da contextualização do tema.